PRACTICA 3:SIEMBRA EN PLACA DE PETRI Y EN TUBO SLANT.

PRACTICA NUMERO 3

3/10/17-6/10/17

OBJETIVOS:

El objetivo de esta práctica no es simplemente hacer que la colonia crezca, sino que lo que queremos es aislarla. Para ello utilizaremos un método, el de siembra por agotamiento de asa en zig-zag, que se tarda más en decir el nombre que en realizar la práctica.

Trabajaremos siempre cerca de la llama (a no ser que dispongamos de cabinas de seguridad), ya que crea un radio de esterilidad de unos 15-20 cm. Cuánto más cerca trabajemos de este llama menor riesgo de contaminación existirá.

UTILIDAD CLINICA:

Esta tecnica se va a utilizar para poder realizar nuevas siembras de microorganismos.

FUNDAMENTOS:

Para poder estudiar el crecimiento bacteriano y obtener poblaciones de las bacterias de interés, es necesario cultivarlas. En esta ocasión vamos a cultivarlas en un medio sólido en placa de Petri y en tubo Slant. Utilizaremos un medio de cultivo general, como el agar nutritivo.

APARATAJE:

-Mechero Bunsen.

MATERIALES:

-Hisopo.

-Asa de platino.

-Cultivo bacteriano ( E.coli)

-Medio de cultivo en placa de petri y en tubo.

-Gradillas para tubos de ensayo.

REACTIVOS:

-No se utilizan reactivos.

PROCEDIMIENTO:

Siembra en placa de petri de E.Coli.

- Lo primero que hay que hacer es coger con el asa de siembra (puede ser un asa reutilizable o un asa desechable) la colonia de interés. Si el asa es desechable tiene que venir en el paquete ya estéril. Si es reutilizable, habrá que flamearla en el mechero hasta que se ponga al rojo vivo. Dejamos enfriar y cogemos la muestra.

- Ahora la pasaremos a nuestra placa de petri, la cual contiene agar sólido y aplicaremos la técnica antes mencionada.

- Se deposita la muestra y se realizan unas cuantas estrías en zig-zag, moviéndola de un lado hacia otro, hasta llegar casi a la mitad de la placa.

- Giramos la placa 90º y realizamos la misma operación. Si el asa es desechable realizamos las estrías en zig-zag sin entrar en contacto con las estrías anteriores, pero si el asa es reutilizable, primero flamearemos el asa y a continuación haremos las estrías en zig-zag arrastrando parte de las anteriores estrías y despúes volvemos a flamear

- Repetimos la misma operación girando la placa 90º.

-  Volvemos a girar la placa 90 ºC .Observamos que nos queda un hueco central en la placa, donde podemos realizar una línea o marca. En esta parte de la placa o incluso antes conseguiremos colonias aisladas de nuestra bacteria, siempre que lo hayamos hecho correctamente.

- Para finalizar la práctica, quemaremos en la llama el asa de siembra, aunque ésta sea desechable de plástico. Es muy importante eliminar todo resto microbiológico y limpiar la zona de trabajo con algún desinfectante.

 Siembra en tubo de E.coli. 

- Flameamos el asa de siembra y tomamos la muestra.

-Retiramos el tapón del tubo, que contiene el medio de cultivo, cogiéndolo con el dedo meñique de la mano derecha (la misma que sostiene el asa).

-Flameamos la boca del tubo después de abrirlo.

-Introducimos el asa de siembra hasta el fondo del tubo y seguidamente vamos deslizándola, con un movimiento de zig-zag, por la superficie del medio desde el fondo hasta la parte superior.

-Volvemos a flamear la boca del tubo antes de poner el tapón.

-Flameamos el asa.

RESULTADOS:

OBSERVACIONES:

En el caso de la siembra en tubo de E.Coli no salio demasiada bien por lo que volví a repetirlo.